Electroforesis en gel Tae
El tampón TAE es una solución compuesta por base Tris, ácido acético y EDTA (Tris-acetato-EDTA). Históricamente es el tampón más utilizado para la electroforesis en gel de agarosa en los análisis de los productos de ADN resultantes de la amplificación por PCR, los protocolos de purificación de ADN o los experimentos de clonación de ADN.
Este tampón tiene una baja fuerza iónica y una baja capacidad de amortiguación. Es el más adecuado para la electroforesis de trozos grandes (>20 kilobases) de ADN y tendrá que ser reemplazado con frecuencia o recirculado para tiempos de ejecución de gel más largos (>4 horas). Teniendo esto en cuenta, es posible que desee considerar la posibilidad de hacer varios lotes del tampón.
Dado que el tampón es fácil de hacer y los pasos se pueden llevar a cabo rápidamente, hacer más de un lote a la vez no debería consumir mucho tiempo ni ser difícil. Siguiendo las instrucciones que se detallan a continuación, la elaboración del tampón TAE sólo debería llevar 30 minutos.
Dado que la elaboración del tampón TAE sólo requiere una serie de instrucciones rápidas y sencillas, el número de materiales necesarios no es excesivo. Sólo necesitarás la sal disódica del EDTA (ácido etilendiaminotetraacético), la base Tris y el ácido acético glacial.
Electroforesis de tae
En biología molecular se utiliza en la electroforesis de agarosa, normalmente para la separación de ácidos nucleicos como el ADN y el ARN[1]. Se compone de tampón Tris-acetato, normalmente a pH 8,3, y EDTA, que secuestra los cationes divalentes. El TAE tiene una capacidad tampón menor que el TBE y puede agotarse fácilmente, pero el ADN lineal de doble cadena se ejecuta más rápidamente en el TAE.
El tampón TAE (Tris-acetato-EDTA) se utiliza como tampón de funcionamiento y en geles de agarosa[3]. También se ha descrito su uso en métodos de electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante para el análisis de mutaciones de amplio alcance[4]. El TAE se ha utilizado en varias concentraciones para estudiar la movilidad del ADN en solución con y sin cloruro de sodio[5]. Sin embargo, las altas concentraciones de cloruro de sodio (y muchas otras sales) en una muestra de ADN retrasan su movilidad. Esto puede llevar a interpretaciones incorrectas del patrón de bandas de ADN resultante.
El tampón TAE se prepara normalmente como una solución madre de 50× para su uso en el laboratorio. Se puede preparar una solución madre de 50× disolviendo 242 g de Tris base en agua, añadiendo 57,1 ml de ácido acético glacial y 100 ml de solución de EDTA 500 mM (pH 8,0), y llevando el volumen final a 1 litro. Esta solución madre puede diluirse 49:1 con agua para obtener una solución de trabajo 1×. Esta solución 1× contendrá 40 mM de Tris, 20 mM de ácido acético y 1 mM de EDTA.
Cómo hacer 1x tae buffer de 10x
El Tris-acetato-EDTA – comúnmente conocido como TAE – es una solución tampón conductora utilizada para experimentos de electroforesis en gel. Normalmente se almacena como una solución concentrada que necesita ser diluida antes de su uso. Dependiendo de la cantidad de tampón que necesites, puedes calcular fácilmente cómo diluir un pequeño volumen de tu reserva utilizando la ecuación C1V1 = C2V2.
Siempre que queramos hacer una dilución a partir de una solución concentrada, debemos tener en cuenta la ecuaciónDonde: Esta ecuación nos dice que la concentración de nuestra solución inicial (C1) multiplicada por el volumen de nuestra solución madre que añadimos durante la dilución (V1) es cada una a la concentración de la solución diluida (C2) multiplicada por el volumen que elegimos para la dilución (V2). Como estos valores son proporcionales entre sí, podemos manipular fácilmente la ecuación para calcular cuánto volumen de nuestra solución madre (V1) necesitamos añadir para crear la solución deseada.
1x composición del tampón tae
En biología molecular, la electroforesis en gel de agarosa es un método común utilizado para muchas aplicaciones, como la clonación, la visualización de los productos de la PCR o la comprobación de si el ADN está intacto.
La principal diferencia entre TBE y TAE, químicamente, tiene que ver con la composición. El TBE incluye Tris, ácido bórico y EDTA. El TAE incluye Tris base, ácido acético glacial y EDTA. El TBE es una buena opción cuando se necesita una alta resolución para pequeños fragmentos de ADN. La TAE es una buena opción cuando se trabaja con fragmentos de ADN más grandes o para la clonación.
En este artículo, proporcionaremos información más detallada para ayudarle a decidir cuál utilizar para su investigación. Proporcionaremos más información sobre las funciones de cada tampón y las diferencias entre ambos.
Así, en función de su peso molecular y de su carga neta, los ácidos nucleicos se desplazan lenta o rápidamente hacia el polo positivo. Las moléculas más pequeñas se desplazan más rápidamente que las más grandes durante la electroforesis en gel.